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小鼠ELISA检测试剂盒按照elisa实验步骤进行测定

时间:2021-03-04 浏览次数:77

   小鼠ELISA检测试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠INS抗体包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的小鼠INS会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠INS抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗小鼠INS抗体与结合在包被抗体上的小鼠INS结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,INS浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中INS的浓度。
 
  小鼠ELISA检测试剂盒按照elisa实验步骤进行测定的,但是没有任何信号,对于使用HRP底物的比色测定,终止液的加入会使底物变色。而说明书推荐的波长就是较适波长。
  通过轻拍酶标板的边缘充分混合孔内试剂。加入终止液时,颜色由蓝变黄(如果是HRP底物)。如果加终止液之前孔内试剂没有混合,则底物颜色变绿。
  可能加入试剂的顺序错误。
  加入底物溶液以后不要清洗酶标板。
  在连续稀释时确定已经加入标准品。
  如果底物系统中有两个成分,则必需混合均匀。
  确定酶标仪的使用和操作正确。
  确定试剂,标准品,样品都正确配制并按照说明滴加无误。
  对于高敏感性试剂盒,确定使用的底物和放大剂都正确稀释。
 
  小鼠ELISA检测试剂盒以灵敏度较高、特异性较好的特点在上得到了广泛的应用,但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大,如不注意,有可能导致显色不全、花板等结果。将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下,以期给同行带来一些启发,提高试验质量。

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