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淋巴细胞因子ELISA试剂盒的操作步骤说明

时间:2021-01-14 浏览次数:9

   淋巴细胞因子ELISA试剂盒采用夹心法酶联免疫吸附法,用于体外定量分析小鼠血清、血浆、细胞裂解液、细胞培养上清中的含量。预先包被的抗体和检测相抗体都是近纯度的多克隆抗体。检测相抗体经生物素标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后,PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应;经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成黄色。
 
  淋巴细胞因子ELISA试剂盒的操作步骤:
  1、准备:从冰箱取出试剂盒,室温复温平衡30分钟。
 
  2、配液:用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。
 
  3、加标准品和待测样本:取足够数量的酶标包被板,固定于框架上,分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔,记录各孔位置,在标准品孔中加入标准品50μL;待测样本孔中先加入待测样本10μL,再加样本稀释液40μL(即样本稀释5倍);空白对照孔不加。
 
  4、温育:37℃水浴锅或恒温箱温育30min。
 
  5、洗板:弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。
 
  6、加酶标工作液:每孔加入酶标工作液50μL,空白对照孔不加。
 
  7、温育:重复4的操作。
 
  8、洗板:重复5的操作。
 
  9、显色:每孔先加入显色剂A液50μL,再加入显色剂B液50μL,37℃避光显色15min。
 
  10、终止:取出酶标板,每孔加终止液50μL,终止反应(颜色由蓝色立转黄色)。
 
  11、测定:以空白孔调零,在终止后15分钟内,用450nm波长测量各孔的吸光值。
 
  12、计算:根据标准品的浓度及对应的OD值,计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样本的OD值,在回归方程上计算出对应的样品浓度,也可以使用各种应用软件来计算。zui终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

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