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人ELISA检测试剂盒所需样本及处理要求

时间:2020-07-28 浏览次数:78

   人ELISA检测试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法。将标准品、待测样本加入到预先包被人幽门螺旋杆菌IgM(Hp-IgM)单克隆抗体透明酶标包被板中,温育足够时间后,洗涤除去未结合的成分,再加入酶标工作液,温育足够时间后,洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B,底物在辣根过氧化物酶催化下转化为蓝色产物,在酸的作用下变成黄色,颜色的深浅与样品中人幽门螺旋杆菌IgM(Hp-IgM)浓度呈正相关,450nm波长下测定OD值,根据标准品和样品的OD值,计算样本中人幽门螺旋杆菌IgM(Hp-IgM)含量。
 
  人ELISA检测试剂盒所需样本及处理要求:
  1.血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
 
  2.血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
 
  3.尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
 
  4.细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
 
  5.组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS,用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
 
  6.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
 
  7.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

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