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分享植物elisa检测试剂盒操作步骤

时间:2020-05-17 浏览次数:385

植物检测试剂盒操作步骤:
1.编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)
2.加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50μl。然后在待测样品孔先 加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品 10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,
3.温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用。
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此 重复 5 次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同 3。
8.洗涤:操作同 5。
9.显色:每孔先加入显色剂 a50μl,再加入显色剂 b50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10 分钟.
10.终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(od 值)。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。
计算和结果判定:
试验有效性:阳性对照孔平均值≥1.00 阴性对照平均值≤0.10
临界值(cut off)计算:临界值=阴性对照孔平均值 0.15
阴性判定:样品 od 值< 临界值(cut off)者为金黄色葡萄球菌肠毒素(se)阴性 阳性判定:样品 od 值≥ 临界值(cut off)者为金黄色葡萄球菌肠毒素(se)阳性。

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